Molekularbiologischer Nachweis von pathogenen Keimen in Lebensmitteln leicht gemacht! Unsere diagnostischen Testsysteme der Marke GeneGen^® verwenden ein neuartiges DNA-Nachweissystem basierend auf Multiplex-PCR mit anschließender verkürzter Hybridisierungsreaktion (GeneGen^®-Technologie) zur Detektion von pathogenen Mikroorganismen aus Flüssigkulturen (z. B. Anreicherungskulturen) oder aus Plattenkultivierung (Einzelkolonien).

Anwenderfreundlich, schnell, verlässlich!

• Kein langwieriges Pipettieren!
  Fertiger Mastermix für die Amplifizierungsreaktion liegt bereits in gefriergetrockneter Form in PCR-Röhrchen vor – nur die aufgearbeitete Probe muss noch zugegeben werden. Dies erspart das mühselige Zusammenmischen von Reagenzien und vermeidet Pipettierfehler und die Gefahr von Kontaminationen.
  
• Bequem und schnell!
  Das spezielle Testformat erlaubt eine starke Verkürzung des Standard- Protokolls für DNA-Hybridisierungen und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30 °C), sodass neben der Zeitersparnis auch die übliche mühsame Inkubation von Hybridisierungsansätzen in Wasserbädern, Inkubatoren oder Ähnlichem entfallen kann. Für die Durchführung der Hybridisierung ist lediglich ein Orbital- oder Kippschüttler nötig.
  
• Verlässlich und sensitiv!
  1-10 koloniebildende Einheiten / 25g Lebensmittel sind nachweisbar, bereits nach der Voranreicherung innerhalb von 24 Stunden. Integrierte interne Positivkontrolle zur Überprüfung der Reaktion!
  

Folgende Testkits sind zur Zeit erhältlich:

• GeneGen^® EHEC Detection Kit
  Nachweis und Charakterisierung von enterohämorrhagischen Escherichia coli – Stämmen innerhalb von nur 24 Stunden!
  
• GeneGen® EHEC_plus Detection Kit
  Nachweis und Charakterisierung von enterohämorrhagischen Escherichia coli – Stämmen und Differentialdiagnose von STEC 0104:H4 aus Lebensmitteln oder Stuhlproben innerhalb von nur 24 Stunden unter Verwendung von 6 Genen!
  

GeneGen® EHEC Detection Kit

DNA-Nachweissystem basierend auf einer patentierten Multiplex-PCR Technik mit anschließender Hybridisierungsreaktion
zur Detektion und Charakterisierung von
enterohämorrhagischen Escherichia coli-
Stämmen aus Flüssigkulturen
(z.B. Anreicherungskulturen) und aus
Plattenkultivierung (Einzelkolonien).



Testprinzip

Der GeneGen EHEC Detection Kit ist ein Kit
zum Nachweis und zur teilweisen
Charakterisierung von EHEC-Stämmen auf
molekularbiologischer Basis.
Vier typische Gene, die in EHEC vorhanden
sein können, nämlich die Gene für
Shiga-like Toxin 1 und 2, ein O157-spezifisches Gen, und das Intimin-Gen (eaeA), sowie eine interne Positivkontrolle werden in einer einzigen Reaktion aufamplifiziert (Multiplex-PCR) und danach mittels einer Sandwich-Hybridisierung und einer Farbreaktion auf Teststreifchen nachgewiesen. Das spezielle Testformat erlaubt eine starke Verkürzung des Standard-Protokolls für DNA-Hybridisierungen und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30°C), sodass neben der Zeitersparnis auch die übliche unbequeme Inkubation von Hybridisierungsansätzen in Wasserbädern, Inkubatoren oder Ähnlichem entfallen kann.

Arbeitsschritte:	Schritt Dauer
Anzucht auf Platten oder in Flüssigkultur (z. B. Anreicherungskulturen von Hackfleisch)	über Nacht 16-18 Stunden
DNA-Extraktion	< 1 Std.
PCR	ca. 2,5 Stunden
Hybridisierung	ca. 1 Stunde
Farbreaktion	max. 2 Stunden

Der Nachweis ist somit innnerhalb von 24 Stunden möglich, die Durchführung des eigentlichen Tests mittels Kit (ohne Anzucht bzw. Anreicherung) nimmt hierbei nur maximal 4-5 Stunden in Anspruch, bei geringem Arbeitsaufwand und geringer Hands-on time. Neben O157 können auch andere EHEC-Serotypen (STEC = Shiga-Toxin produzierende Escherichia coli) sowie EPEC (enteropathogene E. coli) und andere SLT-produzierende Genera erkannt werden, wie etwa Shigella dysenteriae, je nachdem, welche Gene im Test nachgewiesen werden.

Samples:

1. Escherichia coli, non-pathogenic

2. enteropathogenic Escherichia coli strain (EPEC) with eaeA gene

3. Escherichia coli, non-pathogenic

4. EHEC (STEC): non-O157, with SLT2 gene and eaeA

5. EHEC (STEC): non-O157, with SLT1 gene and eaeA

6. Escherichia coli O157, no toxin genes, with eaeA

7. Escherichia coli O157 (EHEC), with SLT2 gene and eaeA

8. Escherichia coli O157 (EHEC), with SLT1 gene and eaeA

9. Escherichia coli O157 (EHEC), with both toxin genes and eaeA

10. Escherichia coli, strain from swine (non-O157, no eaeA gene, possesses a variant of the SLT2 gene)

11. PCR negative control (water instead of sample)

12. Invalid result (no signal for internal positive control)

GeneGen® EHEC_plus Detection Kit

DNA-Nachweissystem basierend auf einer patentierten Multiplex-PCR Technik mit anschließender Hybridisierungsreaktion
zur Detektion und Charakterisierung von
enterohämorrhagischen Escherichia coli-
Stämmen aus Flüssigkulturen
(z.B. Anreicherungskulturen) und aus
Plattenkultivierung (Einzelkolonien).


Testprinzip

Der GeneGen EHECplus Detection Kit ist ein Kit
zum Nachweis und zur teilweisen
Charakterisierung von EHEC-Stämmen auf
molekularbiologischer Basis.
Sechs typische Gene, die in EHEC vorhanden
sein können, nämlich die Gene für
Shiga-like Toxin 1 und 2, ein O157-spezifisches Gen, das Intimin-Gen (eaeA), sowie zusätzlich für die Serotype 0104:H4 das Flagellin Gen (fliC H4) und das Gen für die Eisenaufnahme (iha) und eine interne Positivkontrolle werden in einer einzigen Reaktion aufamplifiziert (Multiplex-PCR) und danach mittels einer Sandwich-Hybridisierung und einer Farbreaktion auf Teststreifchen nachgewiesen. Das spezielle Testformat erlaubt eine starke Verkürzung des Standard-Protokolls für DNA-Hybridisierungen und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30°C), sodass neben der Zeitersparnis auch die übliche unbequeme Inkubation von Hybridisierungsansätzen in Wasserbädern, Inkubatoren oder Ähnlichem entfallen kann.


Arbeitsschritte:

Der Nachweis ist somit innnerhalb von 24 Stunden möglich, die Durchführung des eigentlichen Tests mittels Kit (ohne Anzucht bzw. Anreicherung) nimmt hierbei nur maximal 4-5 Stunden in Anspruch, bei geringem Arbeitsaufwand und geringer Hands-on time. Neben O157 können auch andere EHEC-Serotypen (STEC = Shiga-Toxin produzierende Escherichia coli),sowie EPEC (enteropathogene E. coli), STEC 0104:H4 und andere SLT-produzierende Genera erkannt werden, wie etwa Shigella dysenteriae, je nachdem, welche Gene im Test nachgewiesen werden.

Samples:

1. positive control-DNA GeneGen® EHECplus Kit (all targets+)
2. EHEC (SLT 1+)
3. EHEC (SLT 2+, eae+, iha+)
4. German Outbreak isolate STEC O104:H4 (SLT 2+, iha+, fliC H4+)
5. EHEC (SLT 1+, eae+, iha+)
6. E. coli, serotype O157, non- toxinogen (O157+,eae+, iha+)
7. EHEC, serotype O157 (SLT 2+, O157+, eae+, iha+)
8. EHEC, serotype O157 (SLT 1+, O157+, eae+, iha+)
9. EHEC EDL933, serotype O157 (SLT 1+, SLT 2+, O157+, eae+, iha+)
10. Escherichia coli, isolate from pig (SLT 2+, iha+)
11. enteropathogenic E. coli (eae+)
12. Escherichia coli (non pathogen)
13. Reagent control (water)
14. invalid result (negative for internal positive control)

1. Anreicherungskultur oder Platte 16-18 Stunden.
2. Für Einzelkolonien: Einzelkolonie in 100µl Wasser für die Molekularbiologie resuspendieren. Weiter mit Schritt 6. Für Flüssigkulturen: 100µl Flüssigkultur entnehmen.
3. Bakterien abzentrifugieren.
4. Bakterienpellet mit 100µl Wasser für die Molekularbiologie waschen und abzentrifugieren.
5. Bakterienpellet in 100µl Wasser für die Molekularbiologie resuspendieren.
6. Probe 20 Minuten auf 95-100 °C erhitzen, abkühlen lassen und abzentrifugieren.
7. Nur für die Untersuchung von Stuhlproben: DNA- Extraktion erfolgt unter Verwendung des GeneGen Extraction Reagents welches im GeneGen EHEC Stuhlkit enthalten ist unter Verwendung eines Ultraschallbades wie in der Gebrauchsanweisung beschrieben.
8. 25µl des Überstandes in der PCR einsetzen.
9. Teststreifchen vorbereiten, 10 µl PCR-Produkt denaturieren und Hybridisierungsmix vorbereiten.
10. 30 Minuten Hybridisierung
11. 2x10 Minuten waschen, Färbelösung vorbereiten.
12. Streifchen 1 Minute äquilibrieren.
13. Bis zu 2 Stunden Farbreaktion.