Molekularbiologischer Nachweis von pathogenen Keimen in Lebensmitteln leicht gemacht! Unsere diagnostischen Testsysteme der Marke GeneGen® verwenden ein neuartiges DNA-Nachweissystem basierend auf Multiplex-PCR mit anschließender verkürzter Hybridisierungsreaktion (GeneGen®-Technologie) zur Detektion von pathogenen Mikroorganismen aus Flüssigkulturen (z. B. Anreicherungskulturen) oder aus Plattenkultivierung (Einzelkolonien).
Anwenderfreundlich, schnell, verlässlich!
- Kein langwieriges Pipettieren!
Fertiger Mastermix für die Amplifizierungsreaktion liegt bereits in gefriergetrockneter Form in PCR-Röhrchen vor – nur die aufgearbeitete Probe muss noch zugegeben werden. Dies erspart das mühselige Zusammenmischen von Reagenzien und vermeidet Pipettierfehler und die Gefahr von Kontaminationen.
- Bequem und schnell!
Das spezielle Testformat erlaubt eine starke Verkürzung des Standard- Protokolls für DNA-Hybridisierungen und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30 °C), sodass neben der Zeitersparnis auch die übliche mühsame Inkubation von Hybridisierungsansätzen in Wasserbädern, Inkubatoren oder Ähnlichem entfallen kann. Für die Durchführung der Hybridisierung ist lediglich ein Orbital- oder Kippschüttler nötig.
- Verlässlich und sensitiv!
1-10 koloniebildende Einheiten / 25g Lebensmittel sind nachweisbar, in vielen Fällen bereits nach der Voranreicherung innerhalb von 24 Stunden. Integrierte interne Positivkontrolle zur Überprüfung der Reaktion!
Folgende Testkits sind zur Zeit erhältlich:
- GeneGen® EHEC Detection Kit
Nachweis und Charakterisierung von enterohämorrhagischen Escherichia coli – Stämmen innerhalb von nur 24 Stunden!
- GeneGen® Salmonella Detection Kit
Nachweis von Salmonellen innerhalb von nur 24 Stunden!
- GeneGen® Listeria Detection Kit
Nachweis von Listerien (genus) und Listeria monocytogenes (species)
innerhalb von 3 Werktagen!
- GeneGen® Major Food Pathogens Detection Kit
Nachweis von Salmonellen, EHEC, Listeria monocytogenes und Campylobacter
in einer einzigen Amplifizierungs-Reaktion!
Am Beispiel von:
GeneGen® EHEC Detection Kit
DNA-Nachweissystem
basierend auf einer patentierten Multiplex-PCR Technik mit anschließender
Hybridisierungsreaktion
zur Detektion und Charakterisierung von
enterohämorrhagischen Escherichia coli-
Stämmen aus Flüssigkulturen
(z.B. Anreicherungskulturen) und aus
Plattenkultivierung (Einzelkolonien).
Testprinzip
Der GeneGen EHEC Detection Kit ist ein Kit
zum Nachweis und zur teilweisen
Charakterisierung von EHEC-Stämmen auf
molekularbiologischer Basis.
Vier typische Gene, die in EHEC vorhanden
sein können, nämlich die Gene für
Shiga-like Toxin 1 und 2, ein O157-spezifisches Gen, und das Intimin-Gen
(eaeA), sowie eine interne Positivkontrolle werden in einer
einzigen Reaktion aufamplifiziert (Multiplex-PCR) und danach mittels einer Sandwich-Hybridisierung
und einer Farbreaktion auf Teststreifchen nachgewiesen. Das spezielle Testformat
erlaubt eine starke Verkürzung des Standard-Protokolls für DNA-Hybridisierungen
und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30°C), sodass neben
der Zeitersparnis auch die übliche unbequeme Inkubation von Hybridisierungsansätzen
in Wasserbädern, Inkubatoren oder Ähnlichem entfallen kann.
| Arbeitsschritte: | Schritt Dauer |  |
| Anzucht auf Platten oder in Flüssigkultur
(z. B. Anreicherungskulturen von Hackfleisch) |
über Nacht 16-18 Stunden | |
| DNA-Extraktion | < 1 Std. | |
| PCR | ca. 2,5 Stunden | |
| Hybridisierung | ca. 1 Stunde | |
| Farbreaktion | max. 2 Stunden | |
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In den meisten Fällen ist ein Nachweis also innnerhalb von 24 Stunden möglich, die Durchführung des eigentlichen Tests mittels Kit (ohne Anzucht bzw. Anreicherung) nimmt hierbei nur maximal 6-7 Stunden in Anspruch, bei geringem Arbeitsaufwand und geringer Hands-on time. Neben O157 können auch andere EHEC-Serotypen (STEC = Shiga-Toxin produzierende Escherichia coli) sowie EPEC (enteropathogene E. coli) und andere SLT-produzierende Genera erkannt werden, wie etwa Shigella dysenteriae, je nachdem, welche Gene im Test nachgewiesen werden.
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Typische Ergebnisse GeneGen® EHEC |
| Nachgewiesene Gene (von links nach rechts): | |
| Shiga-like Toxin 1 (a) | |
| Shiga-like Toxin 2 (b) | |
| O157-spezifisches Gen (c) | |
| eaeA (d) | |
| interne Positivkontrolle (e) | |
| Hybridisierungs-Negativkontrolle (f) | |
Kurzprotokoll
- Anreicherungskultur oder Platte 16-18 Stunden.
- Für Einzelkolonien: Einzelkolonie in 100µl Wasser für die Molekularbiologie resuspendieren. Weiter mit Schritt 6. Für Flüssigkulturen: 100µl Flüssigkultur entnehmen.
- Bakterien abzentrifugieren.
- Bakterienpellet mit 100µl Wasser für die Molekularbiologie waschen und abzentrifugieren.
- Bakterienpellet in 100µl Wasser für die Molekularbiologie resuspendieren.
- Probe 20 Minuten auf 95-100 °C erhitzen, abkühlen lassen und abzentrifugieren.
- 25µl des Überstandes in der PCR einsetzen.
- Teststreifchen vorbereiten, 10 µl PCR-Produkt denaturieren und Hybridisierungsmix vorbereiten.
- 30 Minuten Hybridisierung
- 2x10 Minuten waschen, Färbelösung vorbereiten.
- Streifchen 1 Minute äquilibrieren.
- Bis zu 2 Stunden Farbreaktion.
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