Schnellnachweis für Salmonellen
Unsere neu entwickelte RNAssay® - Technologie
ermöglicht den hochspezifischen molekularbiologischen
Nachweis von Salmonellen in Lebensmitteln innerhalb von nur 2 Stunden!
Was ist die RNAssay®-Technologie?
Die RNAssay®-Technologie basiert auf dem präzisen Nachweis einer einzigartigen Abfolge der Bausteine (Sequenz) in den Molekülen der ribosomalen RNA (rRNA) mittels Nukleinsäurehybridisierung. Diese Sequenz ist für den entsprechenden Keim so typisch wie ein Fingerabdruck. Darüber hinaus sind die rRNA-Moleküle in lebenden Zellen in einer so großen Anzahl vorhanden, dass für den Nachweis keine weitere enzymatische Vermehrung (Amplifizierung oder Polymerasekettenreaktion) notwendig ist. Da RNA in abgestorbenen Zellen relativ rasch abgebaut wird, erfasst der Test nur lebende Keime.
Ein weiterer wesentlicher Vorteil der RNAssay® - Technologie besteht darin, dass die für den molekularbiologischen Nachweis erforderlichen Arbeitsschritte stark vereinfacht wurden Die Tests können mit einem simplen Protokoll in jedem Labor ohne Spezialkenntnisse oder teure Laborgeräte verwendet werden.
Anwendungsbereiche
Das RNAssay® Testsystem ist ideal geeignet zur raschen Bestätigung direkt aus sämtlichen konventionellen Selektivanreicherungsmedien sowie von Einzelkolonien auf Selektivagarplatten. Dadurch können selbst konventionelle Nachweisverfahren stark verkürzt und vereinfacht werden.
Darüber hinaus funktioniert der Test aber auch mit initial reaktiven Proben aus dem Pathogenscreening mittels Impedanzgeräten (z. B. SyLab BacTrac) oder immunologischer Testsysteme (ELISA) sowie zur direkten Identifizierung verdächtiger Kolonien von chromogenen Medien.
Die Tests sind so konzipiert, dass sie auch bei nur geringem Probenanfall sehr effizient eingesetzt werden können.
RNAssay® Testprinzip
Direkt aus der Selektivanreicherung wird die rRNA der Zielorganismen über eine Lysereaktion freigesetzt. Mittels einer Sandwich-Hybridisierung und einer darauf folgenden enzymkatalysierten Farbreaktion wird die Ziel-RNA auf Teststreifchen nachgewiesen. Eine integrierte Kontrolle ermöglicht dabei die Überprüfung der Reaktion, um Anwendungsfehler auszuschließen. Das spezielle Testformat erlaubt eine starke Verkürzung des Standard-Protokolls für Nukleinsäurehybridisierungen und eine Durchführung bei Umgebungstemperatur (20-30° C). Neben der Zeitersparnis entfällt auch die ansonsten übliche Inkubation von Hybridisierungsansätzen in Wasserbädern oder speziellen Inkubatoren. An instrumenteller Ausstattung ist für die Durchführung lediglich ein Orbital- oder Wippschüttler erforderlich.
Die RNAssay® - Technologie erfüllt somit alle Anforderungen an einen einfachen und schnell durchzuführenden, aber dennoch hochempfindlichen und spezifischen Test.
Arbeitsschritte (nach Voranreicherung und selektiver Anreicherung):
| Arbeitsschritt | Dauer |
| Aufarbeitung (Lyse) der angereicherten Probe | 5 Minuten |
| Hybridisierung | 30 Minuten |
| Waschen und Äquilibrieren | ca. 25 Minuten |
| Farbreaktion | ≥ 45 Minuten |
| In den meisten Fällen ist eine Detektion also innerhalb von 2 Stunden nach Abschluss der selektiven Anreicherung möglich, und das bei wenig Arbeitsaufwand | |
Testresultat:
Detektierte Sequenzen (von links nach rechts):
Salmonella-spezifische Sequenz (Linie A)
Integrierte Reaktionskontrolle (Linie B)
Ergebnisse:
1 = negativ für Salmonella
2 = positiv für Salmonella
3 = ungültiges Resultat (Reaktionskontrolle nicht sichtbar)Kurzprotokoll
1. Voranreicherung und selektive Anreicherung bzw. Plattenkultur nach Standardprotokoll.
2. Für Plattenkultur: Einzelkolonie in 100µl Lysepuffer resuspendieren. Für Flüssigkultur: 200µl Kultur mit 200µl Lysepuffer mischen.
3. Teststreifchen in Inkubationswanne legen, 40µl Bakterien-Lysat mit 20 µl Denaturierungslösung mischen und 5 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren. Hybridisierungsmix vorbereiten.
4. 30 Minuten Hybridisierung mit je 0,5 ml Hybridisierungsmix pro Streifchen.
5. 2 x 10 Minuten waschen mit je 2 ml Waschlösung pro Streifchen.
6. Streifchen 1 Minute äquilibrieren mit je 1 ml Substratpuffer pro Streifchen.
7. Farbreaktion (45 Minuten bis maximal 2 Stunden)
